嘌呤霉素（嘌呤霉素对蛋白质合成抑制的作用机理）
本文目录一览：
puromycin筛选细胞浓度多少?
1、Puromycin 标准的施加终浓度范围为1～10 μg/ml，不同细胞puromycin 的工作浓度不同，请查找相关文献（部分细胞参考用量见下图），另外请设不感染筛选对照（未经过病毒感染的野生型细胞），加入等量等浓度的Puromycin 。
2、处理革兰氏阳性菌用溶菌酶的终浓度达300ug/ml，冰上孵育1小时即可。
3、刺激剂浓度：通常在0.1 ~ 50g/mL的范围内有效。在选择刺激剂浓度时，应首先参考相关文献中的标准，然后根据实验目的和样本类型进行调整。 刺激剂用量：常见的用量在1 ~ 100g之间。
4、有几种可能吧。比如，之前如果有人用同样的药物处理同样的细胞，做了gradient、找到了最适浓度，得到预期的结果而发表了文章，我们就可以直接用他的最适浓度，最后把参考文献列上就可以。
5、在细胞培养液中推荐的青霉素的工作浓度为100U/ml，链霉素的工作浓度为0.1mg/ml。青链霉素的浓度最终应为100单位/ml。
6、可以做150g/ml、 200g/ml、300g/ml三个浓度进行筛选。
如何根据嘌呤霉素实验的结果判断核糖体中的A、P是两个分开的独立位点...
1、A位点：氨基酸部位或受位；主要在大亚基上，是接受氨酰基-tRNA的部位，受氨基酸-tRNA；受肽链核苷酸与氨基酸相连系的桥梁是tRNA。P位点：肽基部位或供位；主要在小亚基上，是释放tRNA的部位。供tRNA；供肽链。
2、第一点是要注意，酶切位点边标注了*的一般是指并不仅仅存在一个位点，也就不能用来作为构建质粒的酶切位点。
3、核糖体必须包括至少5个活性中心，即mRNA结合部位、结合或接受AA-tRNA部位（A位）、结合或接受肽基tRNA的部位、肽基转移部位（P位）及形成肽键的部位（转肽酶中心）。此外，还应有负责肽链延伸的各种延伸因子的结合位点。
4、AA + tRNA + ATP---AA～tRNA + AMP + PPi氨酰-tRNA合成酶有氨基酸和tRNA两种底物的专一性结合位点。每一种tRNA只专一携带一种氨基酸，而一种氨基酸可分别被几种tRNA专一携带(因为有密码子简并现象)。
5、可能PABP可以直接与CBP作用或通过一个中介物间接作用(如图1)，通过这种相互作用，mRNA的两末端在空间上十分靠近而形成环状。这与40多年前电子显微照相观察到多核糖体是环状的实验结果一致。
嘌呤霉素对蛋白质合成抑制的作用机理
1、抑制蛋白质的合成：抑制的作用点很多。（1）抑制氨基酸的活化。例如，吲哚霉素是色氨酸的类似物。（2）抑制蛋白质合成的起始。如氨基环醇类抗生素。链霉素与小亚基结合。（3）抑制肽链的延伸。如四环素，封闭小亚基的氨酰位点。
2、（1）抑制细胞壁的形成，如青霉素，主要是抑制细胞壁中肽聚糖的合成。多氧霉素（一种效果很好的杀真菌剂）主要作用是抑制真攻细胞壁中几丁质的合成。
3、能抑制蛋白质合成的抗生素很多，其作用机理也较复杂，主要有下面 4 个方面：①抑制氨酰-tRNA 的形成。如吲哚霉素的抑菌作用是在氨基酸活化反应中和色氨酸竞争与色氨酸激活酶结合，从而抑制氨酰-tRNA的形成。
4、因此，有人认为细胞的生长是在G1期R点上停止的，例如当细胞内环腺苷酸(cAMP)水平增高，细胞密度增加时，可阻止细胞从G1期向S期过渡，用嘌呤霉素抑制蛋白质合成或用放射线菌素D抑制RNA合成，也能延缓细胞从G1期进入S期。
